鹽酸美拉舒敏活性藥物中無(wú)機砷的測定

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鹽酸美拉舒敏活性藥物中無(wú)機砷的測定

Determination of Inorganic Arsenic in Melarsomine Dihydrochloride Active Pharmaceutical Ingredient

( By: Warren T. Corns, Cornelius Brombach and Bin Chen, PSA / UK)

 ( Pittcon Presentation Posters)

Introduction

  鹽酸美拉沙明（C13H21asn8s2·2HCl）是一種治療犬心蠕蟲(chóng)（Dirofilaria immitis）的有效藥物成分。該化合物是一種分子量為501.34g的水溶性有機砷化學(xué)治療劑，化學(xué)上稱(chēng)為二（2-氨基乙基）、二氫氯化物的4-[（4，6-二氨基-1，3，5-三唑-2-基）氨基]苯基二硫代亞砷酸鹽。相對于分子量，活性原料藥含有大約14%的砷。

  根據API中砷（III）和砷（V）的總和，無(wú)機砷的規格限值為50 ppm（mg/kg）。本文討論了用液相色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法（LC-HG-AFS）測定無(wú)機砷的新方法的開(kāi)發(fā)。本文所示的工作是一項初步研究，旨在按照VICH GL2“分析程序方法驗證”指南進(jìn)行更詳細的方法驗證。

  開(kāi)發(fā)這種方法的主要分析挑戰之一是對含14%質(zhì)量砷的活性原料藥化合物中的無(wú)機砷進(jìn)行濃度極限測試。無(wú)機砷極限值為50 ppm，基本上比活性原料藥中的砷質(zhì)量少2800。

Sample Preparation and Instrumentation

   將50mg活性原料藥溶于50ml琥珀A級容量瓶中，用去離子水溶解，制備出1000ppm活性原料藥儲備溶液。使用10到30倍的去離子水進(jìn)一步稀釋?zhuān)虼说扔?0000到30000的重量稀釋系數。樣品中還加入了As III和As V 物種(species )，以檢查峰值恢復率、潛在基質(zhì)效應和確定保留時(shí)間。一旦制備好，所有溶液都儲存在黑暗中，并在4℃冷藏，以防止API降解和亞砷酸鹽氧化成亞砷酸鹽。

   用磷酸鈉緩沖液在pH6.2的條件下，用強陰離子交換柱（PSA C1）分離鹽酸美拉舒明中的無(wú)機砷（亞砷酸鹽和亞砷酸鹽）。在對無(wú)機砷類(lèi)進(jìn)行洗脫后，使用專(zhuān)用沖洗溶液（見(jiàn)表1）從色譜柱中沖洗二氫甲藻紅素。

   圖2顯示了PSA儀器的照片，該儀器包括20.400自動(dòng)取樣器、10.820-2000二元梯度泵洗脫模塊化界面單元和10.055 Millennium Excalibur Hydrode Generation-AFS。在6通閥處使用50μl注入回路，以盡量減少加載到色譜柱上的樣品量。顯示儀器配置的示意圖如圖3所示。當砷從SAX柱上洗脫時(shí)，使用10%的HCl在線(xiàn)酸化，然后使用0.7%的硼氫化鈉還原為砷。這些物質(zhì)在氣液分離器中分離，然后通過(guò)PermapureTM干燥管輸送到原子熒光光譜儀。氣態(tài)氫化砷在氫火焰中被霧化，并用一個(gè)增強放電空心陰極燈激發(fā)。然后用一個(gè)短帶通濾波器測量波長(cháng)隔離后的原子熒光信號。整個(gè)系統由PSA SAMS+軟件4控制。對于CFR 21合規性，可以使用其他第三方軟件包。  

Results and Discussion

   圖4所示為10000倍稀釋的三聚氰胺活性原料藥樣品的典型色譜圖。正如所預期的，無(wú)機砷的主要形式是亞砷酸鹽，這被發(fā)現是低于A(yíng)PI無(wú)機砷極限值50ppm。褪黑素活性原料藥化合物洗脫約15.8分鐘，并與無(wú)機砷物種(species)很好地分離。氫化物發(fā)生的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，Melarsomine API化合物具有較低的氫化物發(fā)生率，從而最大限度地減少高質(zhì)量砷的攜帶量。相反，如果測量是在不產(chǎn)生氫化物的情況下進(jìn)行的，那么探測器污染將是真正的問(wèn)題。該應用程序的主要挑戰是開(kāi)發(fā)合適的流動(dòng)相，以完全沖洗SAX柱中的三聚氰胺。如果達不到這一點(diǎn)，那么美樂(lè )沙明保留強烈，并最終發(fā)生過(guò)度的柱出血，導致檢測器基線(xiàn)升高，無(wú)法檢測到無(wú)機砷物種。圖5顯示了砷極限值下加標樣品的典型色譜圖。用10000倍的稀釋液，在工作溶液中等于5ppb。表2提供了稀釋量在10000至30000倍之間的活性原料藥的一些初步數據，并在稀釋限值處出現峰值。AsIII 的峰值回收率在97%到108%之間，AsV的峰值回收率在74%到92%之間。重復運行的精度通常小于5%。

Conclusions

   建立了測定鹽酸美拉舒敏活性原料藥中無(wú)機砷的新方法。LC-HG-AFS為砷（III）和砷（V）提供了一種低成本、靈敏的分析方案，儀器檢測限分別小于0.1ppb和0.3ppb。對于10000稀釋?zhuān)@相當于活性原料藥中1.0和3.0 ppm的MDL，遠遠低于無(wú)機砷的要求限值。開(kāi)發(fā)了一種專(zhuān)用沖洗液，用于從色譜柱中洗脫活性原料藥。

(API：活性藥物成分)

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